巢式聚合酶链式反应

巢式聚合酶链式反应（嵌套式 PCR）是聚合酶链式反应的一种修饰，旨在减少由于意外引物结合位点的扩增而导致的产物中的非特异性结合。

聚合酶链式反应本身是用于通过温度介导的 DNA 聚合酶扩增 DNA 样本的过程。 这些产品可用于测序或分析，这个过程是许多遗传学研究实验室的关键部分，同时也用于法医和其他人类遗传案例的 DNA 指纹识别。 常规 PCR 需要与目标 DNA 末端互补的引物。 来自 PCR 的产物量随着反应进行的温度循环次数的增加而增加。 一个常见的问题是引物与 DNA 的错误区域结合，产生意想不到的产物。 随着 PCR 循环次数的增加，这个问题变得更有可能。

头式聚合酶链式反应涉及两组引物，用于两次连续的聚合酶链式反应，第二组用于扩增第一轮产物中的次要目标。 这允许在第一轮中对少量运行进行放大，从而限制非特定产品。 第二个嵌套引物组应该只扩增第一轮扩增的目标产物，而不是非特异性产物。 这允许运行更多的总周期，同时最大限度地减少非特定产品。 这对于稀有模板或具有高背景的 PCR 很有用。

目标 DNA 使用第一组引物进行第一轮聚合酶链反应，以绿色显示。 替代和相似引物结合位点的选择提供了一系列产品，只有一个包含预期序列。

第一个反应的产物用第二组引物进行第二次运行，以红色显示。 任何不需要的 PCR 产物都不太可能包含两种新引物的结合位点，从而确保第二次 PCR 的产物几乎没有受到不需要的产物的污染。