重叠延伸聚合酶链式反应

重叠延伸聚合酶链反应（或OE-PCR）是PCR的一个变体。它也被称为重叠延伸拼接/悬垂延伸拼接（SOE）PCR。它被用来在序列的特定点插入特定的突变，或将较小的DNA片段拼接成较大的多核苷酸。

在大多数PCR反应中，每个序列使用两个引物，两端各一个。为了拼接两个DNA分子，在要连接的两端使用特殊引物。对于每个分子来说，要连接的那一端的引物被构造成有一个与另一个分子末端互补的5/'悬臂。在复制发生并退火后，DNA被一个新的序列延长，该序列与要连接的分子互补。

一旦两个DNA分子都以这种方式延伸，就将它们混合起来，只用远端引物进行PCR。引入的重叠互补序列将作为引物，两个序列将被融合。与其他基因拼接技术相比，这种方法的优点是不需要限制性位点。

为了获得更高的产量，一些引物被过量使用，如不对称PCR。

为了在DNA序列中插入突变，需要设计一个特定的引物。这个引物在其5/'端可以包含一个单一的替换或一个新的序列。如果需要删除，则加入被删除的5''序列，因为引物的3''端必须与模板链互补，以便引物能充分地与模板DNA退火。

引物与模板退火后，DNA复制继续到模板的末端。双联体被变性，第二个引物退火到新形成的DNA链上，其中含有第 一个引物的序列。复制继续进行，产生一条含有变异的期望序列的链。

双联体再次变性，第 一引物现在可以与最新的DNA链结合。复制反应继续进行，产生一个完全二聚化的DNA片段。经过进一步的PCR循环，为了扩增DNA，可以用琼脂糖凝胶电泳分离样品，然后用电洗法收集。

有效地生成长于约110个核苷酸的寡核苷酸是非常困难的，因此要在一个序列中插入比110npt引物更远的突变，就必须使用重叠延伸PCR.在OE-PCR中，使用上述技术，被修饰的序列被用来制作两条修饰链，突变位于两端。混合和变性后，让链子退火，产生三种不同的组合。只有在5'端没有重叠的双链允许DNA聚合酶沿3'至5'方向延伸。

分离后，使用初始诱变PCR反应中使用的最外层引物，对洗脱的适当大小的片段进行正常的PCR。