共聚焦激光显微镜

共聚焦激光显微镜是一种可以重建高分辨率图像和三维信息的显微镜。共聚焦显微镜（共焦显微术的主要特点）的焦距是被获得的图像无模糊甚至厚的样品，使得散架。为每个分钟点拍摄一幅图像，然后由计算机对其进行重构以获得完整图像。其原理共聚焦显微镜的本身马文·明斯基但被那些在1953年开发的，作为光源接近理想的激光通过是广义共聚焦“激光”显微镜在20世纪80年代到最后波及变成了。除法线点扫描类型外，还有一种使用Nipkow磁盘进行扫描的方法。

在共焦激光显微镜中，激光束从光源的开口发射，用物镜聚焦在样品上，并获得从样品发射的荧光。物镜再次收集荧光和反射激光的混合光。混合的光由分束器分离，并且激光反射的光通过，仅将荧光发送到检测设备。穿过针孔的荧光由光电检测装置（光电倍增管或雪崩光电二极管）检测，并将光信号转换为电信号并记录在计算机中。

检测装置的针孔防止从聚焦位置发射的荧光以外的光进入内部。结果，在具有厚度的样品中可以得到比常规显微镜更清晰的图像（光学切片图像），并且即使在没有厚度的样品中也可以获得具有稍微改善的分辨率的图像。

激光扫描样品，最后获得整个图像。每个像素的亮度通常与所获得的荧光强度成正比。光束扫描由伺服控制镜执行。该扫描方法的反应延迟小。如果降低扫描速度，则可以获得噪声较小的高分辨率图像。可以通过上下移动显微镜平台从多个焦平面收集信息。通过叠加多个焦平面的二维图像，计算机可以创建标本的三维图像。