埃德曼降解

埃德曼降解，由PehrEdman开发，是一种对肽中的氨基酸进行排序的方法。在这种方法中，氨基末端的残基被标记并从肽中裂开，而不破坏其他氨基酸残基之间的肽键。

异硫氰酸苯酯与不带电的N端氨基在弱碱性条件下反应，形成环状苯基硫代氨基甲酰衍生物。然后，在酸性条件下，这个末端氨基酸的衍生物被裂解为噻唑啉酮衍生物。然后，噻唑啉酮氨基酸被选择性地提取到有机溶剂中，并用酸处理，形成更稳定的苯硫醚（PTH）-氨基酸衍生物，可以用色谱法或电泳法来鉴定。然后可以再次重复这个过程来鉴定下一个氨基酸。这种技术的一个主要缺点是，以这种方式被测序的肽不能有超过50至60个残基（在实践中，低于30个）。由于循环衍生化不一定能完成，所以肽的长度受到限制。衍生化问题可以通过在进行反应前将大肽裂解成小肽来解决。它能够准确地对多达30个氨基酸进行测序，现代机器能够对每个氨基酸的效率超过99%。埃德曼降解法的一个优点是它在测序过程中只使用10-100皮摩尔的肽。1967年，Edman和Beggs将Edman降解反应自动化，以加快这一过程，到1973年，全世界已有100台自动化设备在使用。

因为Edman降解是从蛋白质的N端开始的，所以如果N端被化学修饰（如乙酰化或形成焦谷氨酸），它将无法工作。如果遇到非α-氨基酸（如异天冬氨酸），测序将停止，因为有利的五元环中间物无法形成。埃德曼降解法通常对确定二硫桥的位置没有用。它还需要1皮摩尔或以上的肽量才能得到明显的结果。

在二维SDSPAGE之后，蛋白质可以被转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）印迹膜上进行进一步分析。埃德曼降解可以直接从PVDF膜上进行。N端残基测序产生的5到10个氨基酸可能足以确定一个感兴趣的蛋白质（POI）。