血细胞计数板

血细胞计数板，也称为血细胞计数器，用于对颗粒悬浮液中所有类型的小颗粒进行光学显微镜计数。 细胞计数板特别用于医学和生物学中细胞（如红细胞、白细胞）和微生物的定量。

原则上，血细胞计算板是一个中间空间的虚拟部分，由两个间隔很小的平行平行玻璃表面界定。 血细胞计数板形成在玻璃板上，类似于用于光学显微镜检查的载玻片。 然而，它更厚（约 5 毫米）并且具有特殊的表面设计。 一块薄的、经过精密研磨和抛光的玻璃板，即所谓的盖板玻璃，放置在一定高度处，平行于较厚、较大的底板。 底板表面上的线标记标记了底座和盖玻片底面之间的空间，其体积由标记的底座和底座与盖玻片底面之间的距离（腔室高度）决定。 这个已知体积的空间是实际的血细胞计算板。 如果在将颗粒悬浮液引入该室后，用显微镜对标记体积中存在的颗粒进行计数，则颗粒的浓度由它们的数量和体积得出。

血细胞计数板的底板由特殊的光学玻璃制成，具有普通透射光显微镜载玻片的尺寸，即：76 mm × 26 mm，但厚度约为 5 mm。 底板的表面被平行于窄边铣出的凹槽分成 2 个宽区域（外侧）和 3 个窄条（内侧）。 与用于铭文的两个外部区域相比，钢条被打磨平整并抛光。 中央腹板（腔室地板）比位于其侧面的两个腹板低血细胞计数板的高度。 这两个脊形成了盖玻片的支撑（载体脊）。 如果将盖玻片放在这两个条上，则其下表面位于中间条（腔室底部（腔室地板））表面上方的预期高度（腔室深度）。 分隔预期体积的标记刻在底座上。 底座（腔室地板）和盖玻片底面之间的空间以及底座上的线条标记定义了血细胞计数板的体积。

中间杆的室底板通常比两个外侧杆低 0.1 mm（室深度）。 对于细菌等非常小的颗粒，腔室深度仅为 0.02 毫米。 在血细胞计数板的底部中间有一个线网（计数区，计数网格），根据腔室的类型而有所不同。 通常，刻有两个计数网格，它们之间由凹槽隔开。 待计数体积的横向边界由垂直投影到计数网格边界线上的假想平面形成。 细胞计数板的盖玻片与普通光学显微镜的盖玻片不同，它们的表面经过研磨和抛光。 此外，它们比普通盖玻片稍厚，因此它们不会因毛细管力而偏转。 根据血细胞计数板的类型，它们的尺寸（长×宽）为24毫米×24毫米、20毫米×26毫米或22毫米×30毫米，厚度均为0.4毫米。

由于血细胞计数板常被用来测定血细胞浓度，因此它们也被称为血球计数器，盖玻片也被称为血细胞计数器盖玻片。

使用前，腔室应尽可能没有灰尘、棉绒和细胞。 要正确放置盖玻片，请稍微用力（注意，有破损的风险！）以横向格式将其推到两个载体网上。 如果盖玻片正确地固定在载体网上，就可以看到所谓的牛顿干涉色。 这意味着载体网和覆盖玻璃之间的空间高度在光波长的数量级，因此可以忽略不计。 在这种状态下，当血细胞计数板倾斜时，盖玻片不会滑动。

将待计数的颗粒悬浮液移至盖玻片就位的一侧，并通过毛细管力吸入该空间。 颗粒悬浮液因此散布在精确已知厚度的层中。 在光学显微镜下用透射光对计数场上的颗粒进行计数后，可以计算出它们在单位体积内的数量。 对于细胞，除了染色外，还可以使用相差显微镜进行更好的识别。

使用后，应在腔室和盖玻片上仔细涂抹从无绒一次性布中取出颗粒悬浮液，用 70% 2-丙醇或类似的消毒剂清洁并干燥。 盖玻片尤其必须小心处理，因为它是磨平的，因此比普通盖玻片贵很多。

根据要计数的颗粒类型，对一定数量的大方块或组方块进行计数，并从中得出平均值。 如果将该值乘以适当的系数（方形面积与腔室高度的乘积的倒数），则获得每单位体积的颗粒数。 计数时，重要的是不要对位于边界线上的粒子计数两次。 计算一个正方形时，习惯上只计算两条边界线上的粒子（例如顶部和左侧），而不计算其他两条线上的粒子。 在计数之前，建议在低倍率下查看整个网格线，并检查粒子是否相当均匀地分布在方块上。 否则，应再次摇匀颗粒悬浮液并重新应用。 不均匀的分布也可以通过以下事实来识别：当计算几个方格时，每方格的颗粒数波动很大。

在高颗粒浓度（例如酵母悬浮液）的情况下，必须通过稀释建立可计数性。 每个小方块的目标是大约 1 个颗粒。

为此，计算 4 个大角方块并将该数字除以 4 以获得每个角方块的平均值。 该值乘以 10 以获得每微升（微升）的细胞数。 系数 10 的结果是每个角方块的面积为 1 mm²，腔室高度为 0.1 mm，即一个角方块对应 0.1 µl 的体积（1 mm² × 0.1 mm = 0.1 mm³）。。 因此，每个角正方形的电池数量，即每个 0.1 立方毫米，乘以每立方毫米的电池数量 10。 在将细胞悬浮液应用于腔室之前（必须）进行相应的稀释，当然也必须考虑在内。

减少这样的较小细胞的数量。 B. 为了确定细胞培养物中的红细胞或 CHO 细胞，将 5 个方格计数四次，并确定 5 个方格的平均值。 这个数字乘以 50 得到每微升的细胞数 (1 / (5 × 0.04 mm² × 0.1 mm) = 50)。 在这里，也必须考虑任何先前进行的稀释。