免疫组织化学

免疫组化学 (IHC) 是免疫染色最常见的应用。 它涉及利用抗体与生物组织中抗原特异性结合的原理，选择性地识别组织切片细胞中抗原（蛋白质）的过程。

可以通过多种方式实现抗体-抗原相互作用的可视化，主要是以下任一方式：

• 显色免疫组织化学 (CIH)，其中抗体与酶结合，例如过氧化物酶（该组合称为免疫过氧化物酶），可催化产色反应。
• 免疫荧光，其中抗体被标记到荧光团，例如荧光素或罗丹明。

免疫组织化学染色广泛用于诊断异常细胞，例如在癌性肿瘤中发现的细胞。免疫组化学也广泛用于基础研究，以了解生物标记和差异表达蛋白质在生物组织不同部位的分布和定位。

样品的制备对于维持细胞形态、组织结构和目标表位的抗原性至关重要。 这需要适当的组织收集、固定和切片。 福尔马林溶液通常用于固定组织，但也可以使用其他方法。

然后可以将组织切片或整个使用，具体取决于实验目的或组织本身。 在切片之前，组织样本可以包埋在介质中，如石蜡或冷冻介质。 切片可以在各种仪器上切片，最常见的是切片机、低温恒温器或振动切片机。 标本通常在 3 µm-5 µm 的范围内切片。 然后将切片安装在幻灯片上，使用浓度增加的酒精洗涤脱水，并在显微镜下成像之前使用二甲苯等溶剂清除。

根据固定和组织保存的方法，样品可能需要额外的步骤来使表位可用于抗体结合，包括脱蜡和抗原修复。 对于福尔马林固定石蜡包埋的组织，通常需要进行抗原修复，包括用热或蛋白酶对切片进行预处理。 这些步骤可能会导致目标抗原染色或不染色之间的差异。

根据组织类型和抗原检测方法，在抗体染色之前，可能需要分别封闭或淬灭内源性生物素或酶。 与靶抗原上的同源结合位点相似的蛋白质（也称为反应位点）。 大量的非特异性结合会导致高背景染色，从而掩盖目标抗原的检测。 为了减少 IHC、ICC 和其他免疫染色方法中的背景染色，将样品与缓冲液一起孵育，该缓冲液可阻断一抗或二抗可能结合的反应位点。 常见的封闭缓冲液包括普通血清、脱脂奶粉、BSA 或明胶。 具有专有配方的商业封闭缓冲液可用于提高效率。 消除背景染色的方法包括稀释一抗或二抗、改变孵育时间或温度以及使用不同的检测系统或不同的一抗。 质量控制应至少包括已知表达抗原的组织作为阳性对照和已知不表达抗原的组织的阴性对照，以及以相同方式探测但省略一抗（或更好 ，一抗的吸收）。

用于特异性检测的抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。 多克隆抗体是通过给动物注射感兴趣的蛋白质或肽片段，并在刺激二次免疫反应后，从全血清中分离抗体来制备的。 因此，多克隆抗体是识别多个表位的抗体的异质混合物。 单克隆抗体是通过注射动物，然后采集特定的免疫组织样本，分离亲本细胞，并使用由此产生的永生细胞系来产生抗体来制备的。 这导致抗体显示出对单个表位的特异性。