荧光共振能量转移
编辑荧光共振能量转移(FRET),荧光共振能量转移,共振能量转移(RET)或电子能量转移(EET)是描述两个光敏分子(发色团)之间能量转移的机制。 最初处于电子激发态的供体发色团可以通过非辐射偶极-偶极耦合将能量转移到受体发色团。 这种能量转移的效率与供体和受体之间距离的六次方成反比,使得 FRET 对距离的微小变化极其敏感。
FRET 效率的测量可用于确定两个荧光团是否在彼此的特定距离内。 这种测量被用作包括生物学和化学在内的领域的研究工具。
FRET 类似于近场通信,因为相互作用的半径远小于发射光的波长。 在近场区域,激发的生色团发射出一个虚光子,该光子立即被接收生色团吸收。 这些虚光子是无法检测到的,因为它们的存在违反了能量和动量守恒,因此 FRET 被称为无辐射机制。 量子电动力学计算已用于确定无辐射 (FRET) 和辐射能量转移是单一统一机制的短程和长程渐近线。
术语
编辑当两个发色团都是荧光时,通常使用术语荧光共振能量转移来代替,尽管能量实际上并不是通过荧光转移的。 为了避免错误地解释总是非辐射能量转移的现象(即使发生在两个荧光发色团之间),更喜欢使用荧光共振能量转移这个名称而不是荧光共振能量转移; 然而,后者在科学文献中享有普遍的用法。 FRET 不限于荧光,也与磷光有关。
理论基础
编辑FRET 效率 ( E {displaystyle E} ) 是能量转移跃迁的量子产率,即每次供体激发事件发生能量转移事件的概率:
E = k ET k f + k ET + ∑ k i ,
其中 k ET 是能量转移率,k f 是供体的辐射衰减率,k i 任何其他去激发途径的速率,不包括向其他受体的能量转移。
FRET 效率取决于许多物理参数,这些参数可归类为:1) 供体和受体之间的距离(通常在 1–10 nm 范围内),2) 供体发射光谱和受体吸收的光谱重叠 光谱,和 3) 供体发射偶极矩和受体吸收偶极矩的相对方向。
E 取决于供体-受体分离距离 r 由于偶极-偶极耦合机制.
其中R 0 是这对供体和受体的Förster距离,即能量转移效率为50%的距离。Förster距离取决于供体发射光谱的重叠积分 具有受体吸收光谱及其相互分子取向,
其中 f D 是供体发射光谱,f D 是供体 发射光谱归一化为 1 的面积,而 ε A 是受体摩尔消光系数,通常从吸收光谱中获得。
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