黏质粒

粘性质粒是一种含有Lambda噬菌体cos序列的混合质粒。它们经常被用作基因工程中的克隆载体。粘性质粒可用于建立基因组库。

根据正常噬菌体包装尺寸的限制，粘性质粒可包含37至52（通常为45）kb的DNA。如果它们有合适的复制源（ori），就可以作为质粒进行复制：例如哺乳动物细胞中的SV40 ori，双链DNA复制的ColE1 ori，或原核生物中单链DNA复制的f1 ori。

它们通常还含有选择基因，如抗生素抗性，因此可以通过在含有抗生素的细胞培养基上电镀来确定转化。那些不吸收宇宙粒的细胞将不会生长。

与质粒不同，它们也可以在体外被包装成噬菌体外壳，这一步骤需要内聚端，也称为cos位点，也可用于以λ噬菌体为载体的克隆，然而几乎所有的λ基因都被删除，cos序列除外。然后可以通过转导将帽状体中的杂交细胞质DNA转移到细菌细胞中。

由于体外包装对cos位点之间的DNA至少有38kb的要求，没有插入DNA的载体不会被包装（如果新插入的DNA含有许多直接重复或复数（倒置重复）的DNA，质粒的不稳定性会增加。

这种不稳定性在很大程度上可以通过使用具有影响DNA重组的特定突变的宿主细菌来抵消。

Cos序列长约200个碱基对，对包装来说是必不可少的。它们包含一个cosN位点，DNA在每条链上以12bp的间隔被终止酶切开。（DNA必须是线性的，以适应噬菌体的头部。）cosB位点容纳终止酶，同时终止酶切割并分离链。下一个细胞体的cosQ位点（因为滚动循环复制常常导致线性并发症）在前一个细胞体被包装后由终止酶保持，以防止细胞体DNase的降解。

粘性质粒主要是带有细菌oriV、抗生素选择标记和克隆位点的质粒，但它们携带一个或最近两个来自噬菌体λ的cos位点。根据实验的具体目的，有多种宿主范围的宇宙码、穿梭宇宙码或 "哺乳动物 "宇宙码（与SV40 oriV和哺乳动物选择标记相连）可供选择。

装载的宇宙码的数量根据载体本身的大小而变化，但通常约为40-45kb。克隆过程包括生成两个载体臂，然后将其与外来DNA连接。对野生型粘性质粒DNA的选择是通过简单的尺寸排除法完成的。

因此，粘性质粒总是形成菌落而不是斑块。此外，克隆的密度要低得多，每µg连接的DNA大约有105-106个CFU。

在构建重组λ或玉米素文库后，通过一种称为体外包装的技术将总DNA转移到适当的大肠杆菌宿主。必要的包装提取物来自大肠杆菌cI857溶酶体（分别为Red-Ga-Sam和Dam（头部组装）和Em（尾部组装））。

这些提取物将在体外识别并包装重组分子，生成成熟的噬菌体颗粒（基于λ的载体）或包含在噬菌体外壳中的重组质粒（宇宙体）。

这些差异反映在有利于λ型替代载体的不同感染频率上。这弥补了其稍低的装载能力。噬菌体库也比细胞质库更容易储存和筛选。

目标DNA：待克隆的基因组DNA必须被裂解成适当大小的限制性片段。这通常是通过部分限制，然后进行大小分化或去磷酸化（使用小牛胰蛋白酶）来完成，以避免染色体的混乱，即物理上不相连的片段的连接。