基因组编辑
编辑基因组编辑或基因组手术,是对DNA进行靶向修饰的分子生物学技术的统称,包括植物、动物和人类的基因组。
作用方式
编辑所谓的设计核酸内切酶用于在复杂生物体的基因组中引入靶向变化。 这些酶在预定的目标序列处切割双链 DNA,造成双链断裂。 双链断裂反过来激活细胞中的 DNA 修复过程,例如非同源末端连接 (NHEJ) 或同源修复,也称为同源定向修复 (HDR)。 虽然基因是使用 NHEJ 专门灭活的,但 HDR 可用于将定义的突变或整个 DNA 片段定向插入基因组。
酶
编辑常用的设计核酸酶类别包括锌指核酸酶 (ZFN)、转录激活因子样效应核酸酶 (TALEN)、CRISPR/Cas 方法、CRISPR/Cpf1 系统和大范围核酸酶(修饰的归巢核酸内切酶)。 在锌指核酸酶、TALEN 和大范围核酸酶中,对 DNA 的特异性识别是由特定的蛋白质部分进行的,而在 CRISPR 系统中,它是由特定的 RNA 介导的。
应用
编辑基因组编辑用于微生物(白色基因工程)、植物(绿色基因工程)、动物(红色基因工程)和人类(基因治疗)基因组的靶向改变。 基因组编辑可用于特异性破坏基因(基因敲除),在基因组中的特定位置引入基因(基因敲入),或纠正基因中的点突变。
碱基编辑
编辑基因组编辑的一种新的精确方法是改变DNA序列中的单个碱基(碱基编辑)。 无法再切割 DNA 的 Cas9 核酸酶的突变形式与脱氨酶结合。 这种融合蛋白能够与sgRNA特异性识别所需的DNA序列,并通过脱氨作用改变碱基。 在与胞苷脱氨酶融合的情况下,胞苷转化为尿嘧啶,通过 DNA 修复和复制被胸苷取代。 这会将碱基对 C-G 突变为 T-A。 或者,Cas9 可以与腺苷脱氨酶偶联,使腺苷转化为肌苷,在 DNA 修复和复制后被鸟苷取代。 在这种情况下,碱基对 A-T 被转换为 G-C。 碱基编辑效率在5%到50%之间。 因为 DNA 没有被切割,不需要的变化不太常见。所有 12 种可能的点突变都可以通过 prime 编辑实现。
监管方面
编辑对于基因组编辑生物是否应归类为转基因生物 (GMO) 以及是否应因此应用适用于 GMO 的指南,目前尚无一致意见。 目前,农业中的可能应用,以及可想象的医学用途都处于前景。
植物育种
来自不同国家的专家建议,基因组编辑的植物只要不含有外来DNA,就等同于常规育种的植物。 这一观点考虑到这样一个事实,即基因组编辑植物通常与传统育种植物没有区别,而且它们也可以使用传统方法进行育种。
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